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挑战

如果单独的标记分子（下图黑点）过于互相靠近，距离小于衍射极限，则无法单独区分成像 – 它们各自模糊的图像互相重叠，在200 nm 以下您能看到的就像一锅不清晰的朦胧的，没有任何细节的粥。

由于衍射，聚焦的激发激光照射的区域（下图绿色）总是大于所用光线波长的一半。该区域内的所有分子都受激发光，如果此区域内有一个以上的分子，则无法分辨彼此。

解决方案

所有与亚衍射极限区域毗邻的荧光基团都暂时性保持荧光暗态，这样它们就可以分别识别。它们的模糊图像不会重叠，由此可依序记录。实现超高分辨率的基本方法实际上非常巧妙简单 – 利用标记染料进行可控的开/关转变！

因此，染料是纳米级分辨率的关键。abberior精通于设计使用第二光源来控制开/关转换的染料。