RESOLFT
可逆饱和光学荧光转化
原理
RESOLFT 代表普遍的转换原理:转换机制不再只是纯电子形式,而是包括像分子构象等的转变。严格来说,STED 方法是 RESOLFT 概念一种可能的应用。
该途径与 STED 相似 – 使用重叠的激发与转换光束进行扫描。
根据转换实施方法的不同,典型饱和光强和典型转换时间都具有特征性,例如和 STED 的电子状态转换相比,构象转变需要低的多的转换光强度,而转换时间则明显变长。
下图为实现 RESOLFT 的一个例子 – 通过光诱导化学反应,使无色非荧光前体转变成高亮荧光染料。
设置
其系统设置与 STED 相似 – 使用重叠的激发与转换光束进行扫描。在 STED 设置中,转换光束是指 STED 光束。相位板负责将转换光束在焦平面上重新分布,即形成甜甜圈形光束。
结果
由于焦点正中心只有一个分子处于开启发光状态,RESOLFT 理论上可实现无限高分辨率(参见 STED 部分的公式)。
探测器只需探测到一个光子就可以纳米级分辨率探测到单个分子(分子簇)。